試劑盒應(yīng)用

本試劑盒可用于動物組織或細(xì)胞DNA 的克隆、重組細(xì)胞株鑒定、DNA 病毒鑒定、STR 鑒定等。依托NuSmart®平臺升級TC-DNA Lysis 配方，10 分鐘內(nèi)裂解各種細(xì)胞和組織。使用過程中無需大量樣本、無需反復(fù)離心，從而獲得高質(zhì)量的DNA 模板。該試劑盒可以對單個細(xì)胞或10 個病毒粒子進(jìn)行檢測。

本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

試劑盒組成

保存條件

-20oC 保存。

TC-DNA Lysis 和2×TaqMix(With Dye)長期使用可4℃保存，避免反復(fù)凍融。

需要準(zhǔn)備

金屬恒溫浴、離心機(jī)、PCR 儀

使用方法

一、不同樣品的處理方法

1. 組織液的處理

（1）組織液包括組織研磨液、細(xì)胞懸液、全血、血清、拭子處理液等。取10 μL組織液※置于離心管中。

※：棉簽放入500μL生理鹽水或無菌水中，浸泡5-10min，用力擠壓后取10 μL置于離心管中。

（2）加入20 μL TC-DNA Lysis。

（3）充分混勻。

（4）置于55℃作用5 分鐘。溶液即為DNA 模板。

2. 組織塊的處理

（1）用眼科剪剪取1-2mm 的組織塊，并將組織塊剪成肉泥狀。

（2）加入20 μL TC-DNA Lysis。

（3）充分混勻。

（4）置于55℃作用5 分鐘。

（5）10,000rpm 離心60 秒取上清。上清即為DNA 模板。

二、推薦PCR 反應(yīng)體系

三、按照以下方法設(shè)定PCR 反應(yīng)

注意事項(xiàng)

一、試劑盒使用前注意事項(xiàng)

（1）所有試劑應(yīng)按照溫度儲存。請勿反復(fù)凍融。

（2）使用前需要對操作區(qū)進(jìn)行消毒，消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均使用商品化的無酶耗材。

（3）TC-DNA Lysis 采用配方，若出現(xiàn)肉眼可見小球狀物質(zhì)屬于正?，F(xiàn)象。

（4）TC-DNA Lysis 頻繁使用，可在4℃保存。長期不使用可放-20℃保存。

二、樣本注意事項(xiàng)

（1）細(xì)胞無需離心，在含/不含血清的環(huán)境中均可直接使用。

（2）擴(kuò)增2kb 以內(nèi)片段，細(xì)胞樣品濃度不超過1000 個細(xì)胞。如若擴(kuò)增片段超過2kb，可適當(dāng)提高細(xì)胞濃度。

（3）不同組織使用不同的眼科剪和眼科鑷進(jìn)行處理，防止交叉污染導(dǎo)致檢測結(jié)果偏差。

（4）組織樣本僅需要采集1-2mm。

三、試劑盒使用過程中注意事項(xiàng)

（1）PCR 過程中推薦使用陰性對照和陽性對照。

（2）整個過程中使用的吸頭、離心管等耗材應(yīng)丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中，減少環(huán)境污染。

（3）2×Master TaqMix(With Dye)已包含染料，可在反應(yīng)結(jié)束后直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。

（4）PCR 產(chǎn)物3’末端含有A，可直接進(jìn)行TA 克隆。

四、試劑盒使用后注意事項(xiàng)

（1）TC-DNA Lysis 處理后的DNA 模板可在-20℃保存至少1 個月。避免反復(fù)凍融，防止基因組斷裂。

（2）PCR 反應(yīng)完成后，嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)區(qū)開蓋。應(yīng)在污染區(qū)進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，防止氣溶膠污染。

（3）為防止試劑盒污染，請勿將不同批號試劑盒混用。

檢測實(shí)例

來源范圍

細(xì)胞 293T、A549、Vero、PK15、Sp2/0、HCT-116、Marc145、ST、siHa、MCF-7

人 頭發(fā)、唾液、咽拭子、指甲

小鼠 心、肝、脾、肺、腎、腦、脊柱、胃、大腸、小腸、膽囊、尾巴、腳趾、皮、

耳朵、肌肉、EDTA 抗凝血、肝素鈉抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血

豬 心、肝、脾、肺、腎、腦、淋巴結(jié)、咽拭子、唾液、精液、全血、血清

雞 心、肝、脾、肺、胃

亞洲鯽魚 魚鰭、魚泡、魚鱗、魚籽

常見問題解析